如何將講實驗室離心機訓(xùn)練成幫手
實驗室離心機用對了是“幫手”,用錯了就是“殺手”!
就拿植物dna提取來說,原理就是去掉植物細胞壁,細胞膜,質(zhì)體,線粒體,葉綠體然后剩下細胞核了,這就是我們需要的DNA。
通常采用機研磨的方法破碎植物的組織和細胞,由于植物細胞勻漿含有多種酶類(尤其是氧化酶類)對DNA的抽提產(chǎn)生不利的影響,在抽提緩沖液中需加入抗氧化劑或強還原劑(如巰基乙醇)以降低這些酶類的活性。在液氮中研磨,材料易于破碎,并減少研磨過程中各種酶類的作用。
十二烷基肌酸鈉、十六烷基三甲基溴化銨簡稱為CTAB、十二烷基硫酸鈉簡稱SDS,等離子型表面活性劑,能溶解細胞膜和核膜蛋白,使核蛋白解聚,從而使DNA得以游離出來。再加入苯酚和氯仿等有機溶劑,能使蛋白質(zhì)變性,并使抽提液分相,因核酸(DNA、RNA)水溶性很強,經(jīng)離心機離心后即可從抽提液中除去細胞碎片和大部分蛋白質(zhì)。上清液中加入無水乙醇使DNA沉淀,沉淀DNA溶于TE溶液中,即得植物總DNA溶液。
雖然提取植物葉片的DNA比較簡單,用下離心機再根據(jù)植物,找段基因的序列設(shè)計引物,再順勢PCR一下了,看看個能把這段基因擴出來,整個過程其實需要用的到的設(shè)備并不多,重要的就離心機跟PCR儀器。
但是這里面需要注意的細節(jié)有很多,比如:
使用實驗室離心機的注意事項:
1. 離心機在預(yù)冷狀態(tài)時,離心機蓋必須關(guān)閉,離心結(jié)束后取出轉(zhuǎn)頭要倒置于實驗臺上,擦干腔內(nèi)余水,離心機蓋處于打開狀態(tài)。
2. 轉(zhuǎn)頭在預(yù)冷時轉(zhuǎn)頭蓋可擺放在離心機的平臺上,或擺放在實驗臺上,千萬不可不擰緊浮放在轉(zhuǎn)頭上,因為一旦誤啟動,轉(zhuǎn)頭蓋就會飛出,造成事故!
3. 轉(zhuǎn)頭蓋在擰緊后一定要用手指觸摸轉(zhuǎn)頭與轉(zhuǎn)蓋之間有無縫隙,如有縫隙要擰開重新擰緊,直至確認(rèn)無縫隙方可啟動離心機。
4. 在離心過程中,操作人員不得離開離心機室,一旦發(fā)生異常情況操作人員不能關(guān)電源(POWER),要按STOP 。在預(yù)冷前要填寫好離心機使用記錄。
5. 不得使用偽劣的離心使管,不得用老化、變形、有裂紋的離心管。
6. 離心機套管底部要墊棉花或試管墊。
7. 電動離心機如有噪音或機身振動時,應(yīng)立即切斷電源,即時排除故障。
8. 離心管必須對稱放入套管中,防止機身振動,若只有一支樣品管另外一支要用等質(zhì)量的水代替。
9. 啟動離心機時,應(yīng)蓋上離心機頂蓋后,方可慢慢啟動。
10. 分離結(jié)束后,先關(guān)閉離心機,在離心機停止轉(zhuǎn)動后,方可打開離心機蓋,取出樣品,不可用外力強制其停止運動。
使用PCR儀器的注意事項:
(1)PCR儀使用的環(huán)境要恒定,工作環(huán)境的溫度不能過高或過低,最好在用空調(diào)的房間使用,有些PcR儀有溫度保護程序,在過低的溫度下機器不能啟動。
(2)電源要穩(wěn)定,工作的電壓不能波動過大,波動過大會造成電子器件損壞,一般建議將PcR儀電源接于穩(wěn)壓電源上。
但是要注意的是,不論是離心機還是PCR儀器,使用前都要詳細閱讀使用說明書,遇到不能解決的問題不要隨意拆卸機器,應(yīng)該讓生產(chǎn)廠商負(fù)責(zé)售后服務(wù)的專業(yè)工程師進行處理。
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